一、實驗目的

1.了解植物組織中葉綠素的分布和性質。

2.掌握測定葉綠素含量的原理和方法。

二、實驗原理

葉綠素廣泛存在于水果、蔬菜等綠色植物組織中，與植物細胞中的蛋白質結合形成葉綠體。當植物細胞死亡時，葉綠素就會釋放出來。游離葉綠素非常不穩(wěn)定，對光和熱敏感。在酸性條件下，葉綠素形成綠褐色脫鎂葉綠素，在稀堿液中可水解成鮮綠色的葉綠素酸鹽以及葉綠醇和甲醇。高等植物中的葉綠素有兩種：葉綠素a和b，均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。

葉綠素含量的測定方法有很多，包括：1.原子吸收光譜法：通過測定鎂的含量間接計算出葉綠素的含量。2.分光光度法：用分光光度計測量葉綠素提取物在較大吸收波長處的吸光度值，然后可以利用朗伯-比爾定律計算提取物中各色素的含量。

葉綠素a和葉綠素b在645nm和663nm處有較大吸收，兩條吸收曲線在652nm處相交。因此，分別測定了提取物在645nm、663nm和652nm波長處的吸光度值，可根據(jù)經(jīng)驗公式分別計算出葉綠素a、葉綠素b和總葉綠素的含量。

三、儀器、原料和試劑

儀器：分光光度計、電子頂載天平（靈敏度0.01g）、研缽、棕色容量瓶、小漏斗、定量濾紙、吸水紙、擦紙、滴管。

原料：新鮮（或干燥）植物葉子

試劑：1.96%乙醇（或80%丙酮）2.石英砂3.碳酸鈣粉。

四、操作步驟

取新鮮植物葉子（或其他綠色組織）或干燥材料，擦去組織表面污垢，并去除中脈剪碎。稱取2g新鮮剪碎的樣品，放入研缽中，加入少量石英砂、碳酸鈣粉和3mL 95%乙醇，研磨成均質漿液，加入10mL乙醇，繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3到5min。 取1張濾紙放入漏斗中，用乙醇潤濕，將提取液沿玻璃棒倒入漏斗中，濾液倒入100mL棕色容量瓶中；用少量乙醇沖洗研缽、研棒和殘渣數(shù)次，最后與殘渣一起倒入漏斗中。用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直到濾紙和殘渣沒有綠色為止。最后，用乙醇定容至 100 mL，搖勻。取葉綠體色素提取物，在665nm、645nm和652nm波長處測定吸光度，以95%乙醇作為空白對照。

五、計算

根據(jù)實驗原理中提供的經(jīng)驗公式，分別計算出植物材料中葉綠素a、b和總葉綠素的含量。